Obsah:
Trocha historie...
Proč elektrony?| Fixace Prvním krokem přípravy preparátů pro TEM je v naprosté většině případů fixace. Jejím cílem je zachovat buněčnou ultrastrukturu s minimem změn oproti nativnímu stavu, zabránit degradačním procesům a stabilizovat vzorek do dalších kroků přípravy. K fixaci biologických objektů se používají chemické nebo fyzikální metody. Chemická fixace Je založena na reakci některých chemických činidel se složkami biologických objektů, které vedou k jejich stabilizaci a imobilizaci bez větších ultrastrukturálních změn. Chemická fixační činidla se dělí do dvou skupin: Koagulátory - denaturují proteiny a způsobují jejich precipitaci. Jelikož při tomto typu fixace nevznikají žádné vazby mezi různými molekulami, označuje se také jako neaditivní. Mezi tato fixační činidla patří metanol, etanol, kyselina chlorovodíková. Nekoagulátory - při tomto typu fixace dochází k přeměně cytoplasmy v gel transparentní pro elektrony v důsledku vytvoření sítě vazeb mezi různými molekulovými komponenty. Často se označuje také jako aditivní fixace a nejlépe zachovává buněčnou ultrastrukturu z hlediska elektronové mikroskopie. Příkladem tohoto typu fixačních činidel jsou glutaraldehyd, oxid osmičelý, manganistan draselný. Kvalitu fixace ovlivňuje řada faktorů, z nichž za nejdůležitější lze považovat: 1. výběr fixačního činidla 2. velikost vzorku 3. způsob fixace 4. koncentrace a rychlost penetrace fixačního činidla 5. teplota, osmolalita a pH fixačního roztoku 6. délka fixace 7. přídavky dalších látek ovlivňujících průběh fixace Samozřejmě se tyto faktory ovlivňují navzájem, např. teplota ovlivňuje rychlost difuse fixačního činidla a tím i dobu fixace, penetrační rychlost má vliv na velikost preparátu apod. Zatím neexistuje univerzální fixační postup, který by byl vhodný pro všechny typy tkání a buněk. Stanovení vhodného postupu je třeba hledat experimentálně, přičemž na začátku mohou toto hledání usnadnit určité všeobecně platné zásady. |
 Předchozí |
Další  |
 Literatura | |
Obrázky | |
| K této kapitole nejsou žádné obrázky. | |